酶聯(lián)免疫試劑盒的底物A就是顯色劑A（含過氧化氫）為供氫體（DH2）,底物B就是顯色劑B（含TMB）,用于顯色。
另外，常用的底物還有：
1）AP的底物，常用的為對-硝基苯磷酸脂（PNP），其反應(yīng)物為的對硝基酚，測讀波長為405nm2）GOD的底物，為葡萄糖，供氫體為對硝基藍(lán)四氮唑，反應(yīng)產(chǎn)物為不溶性的藍(lán)色沉淀 什么是TMB？TMB即四甲基聯(lián)苯胺（3，3’，5，5’-Tetramethylbenzidine）是一種脂溶性較強(qiáng)的基團(tuán)，因此容易進(jìn)入細(xì)胞與細(xì)胞器中的HRP反應(yīng)，且由于這種高度的脂溶性，使其易形成多聚體，在HRP活性部位產(chǎn)生粗大的、深蘭色沉淀物，這使得TMB成為組化實(shí)驗(yàn)中的一種很好的發(fā)色團(tuán)。同時反應(yīng)產(chǎn)物的沉淀，使得HRP的活性部位更加暴露，利于酶氧化反應(yīng)進(jìn)行。
酶聯(lián)免疫試劑盒TMB的反應(yīng)產(chǎn)物為深藍(lán)色，利于光鏡觀察，且反應(yīng)產(chǎn)物越聚越大，常超出單個細(xì)胞器的范圍（而DAB則被限制在其內(nèi)），故TMB反應(yīng)的檢測閾較低。
由于上述優(yōu)點(diǎn)，目前TMB常用于光鏡及超微結(jié)構(gòu)水平的HRP及HRP-WGA神經(jīng)投射的研究。
需要注意的是：TMB顯色液中的A液和B液應(yīng)在2h內(nèi)新鮮配制。另外，TMB是一種較強(qiáng)的皮膚刺激劑，并有致癌的潛在可能，故使用時應(yīng)帶手套及在通風(fēng)條件下操作。
TMB經(jīng)HRP作用后共產(chǎn)物顯藍(lán)色，目視對比鮮明。TMB性質(zhì)較穩(wěn)定，可配成溶液試劑，只需與H2O2溶液混和即成應(yīng)用液，可直接作底物使用。另外，TMB又有無致癌性等優(yōu)點(diǎn)，因此在ELISA中應(yīng)用日趨廣泛。酶反應(yīng)用HCL或H2SO4終止后，TMB產(chǎn)物由藍(lán)色呈，可在比色計(jì)中定量，zui適吸收波長為405nm。
ABTS雖不如OPD和TMB敏感，但空白值極低，也為一些酶聯(lián)免疫試劑盒所采用。
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