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實際應(yīng)用中，通過不同的設(shè)計，具體的方法步驟可有多種。即：用于檢測抗體的間接法、用于檢測抗原的雙抗體夾心法以及用于檢測小分子抗原或半抗原的抗原競爭法等等。目前我們對客戶提供比較常用的ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法服務(wù)。

羊elisa檢測試劑盒操作步驟：

1、使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差；

2、根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)；

3、加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時；

4、甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次；

5、每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘；

6、甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次；

7、每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照；

8、取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果；

9、在450nm波長處測定各孔的OD值。

羊elisa檢測試劑盒液體類標(biāo)本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清等。

1、血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

2、血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

3、尿液：用無菌管收集。離心20分鐘左右。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。

4、細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融，以使細胞破壞并  放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

5、組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

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